全血基因組DNA提取試劑盒

全血基因組DNA提取試劑盒

全血基因組DNA提取試劑盒原理簡(jiǎn)介
本試劑盒適用于各種動(dòng)物抗凝全血樣本，用于從中提取基因組DNA。*的裂解緩沖液加上蛋白酶K等迅速去掉除DNA外的其他物質(zhì)，并利用玻璃奶吸附DNA，進(jìn)一步的去掉其他雜質(zhì)，提取出來(lái)，得到的DNA可用于PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)
1．裂解液低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在熱水中溫浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2．避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。
3．RNaseA經(jīng)常使用可放2－8度保存，蛋白酶K請(qǐng)放－20度保存。
4．同一樣本，如果想大量提取，可以增加樣本量，并且每一步試劑加量，但使用次數(shù)會(huì)成倍減少。

操作步驟
在合適的容器中，用雙蒸水將紅細(xì)胞裂解液（10×）稀釋成1×。即10ml溶液中加入90ml雙蒸水混勻。
1．取不超過(guò)500ul抗凝血，加入三倍體積的稀釋過(guò)的紅細(xì)胞裂解液，混勻。放置2分鐘，12000rpm離心1分鐘。去上清。再加入2倍體積的紅細(xì)胞裂解液，用移液器輕輕吹打沉淀，充分混勻，離心，棄上清，沉淀為白細(xì)胞。如果血液為家擒類動(dòng)物，因?yàn)榧t細(xì)胞有核，所以可以省去此步，但加入的樣品量不要超過(guò)50ul,直接進(jìn)入下一步。
2．加入250ul裂解液，加入10μl RNase A(10mg/ml)溶液，振蕩混勻，室溫放置5-10分鐘。
3．加入10μl蛋白酶K(10mg/ml)溶液，顛倒混勻，65℃放置10－30分鐘，期間顛倒3－5次，小心內(nèi)心管蓋受熱開(kāi)啟。如30分鐘沉淀無(wú)法*消失，請(qǐng)注意第6步處理。
4，在上清中加入三倍體積無(wú)水乙醇，充分混勻。
5．12000rpm離心5分鐘，吸去上清，核酸在沉淀中。
6．沉淀中加入500ul結(jié)合液，65℃水浴1-2分鐘，核酸沉淀可溶解（如無(wú)法*溶解，可轉(zhuǎn)移上清到一新的離心管中，棄沉淀）。
6．玻璃奶搖勻。加入50ul搖勻的玻璃奶，混勻，室溫放置2分鐘，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘，去上清；沉淀加入1ml 70%乙醇，振蕩混勻，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘，去上清，70%乙醇重復(fù)洗一次，再用無(wú)水乙醇洗一次。去上清，再次離心2分鐘，用小吸頭吸去上清。
7．室溫放置10分鐘（如果玻璃奶加量，請(qǐng)適當(dāng)延長(zhǎng)放置時(shí)間，此步為去除殘余酒精，以免影響下游實(shí)驗(yàn)），加入50－100ul TE緩沖液混勻溶解，65℃水浴5分鐘。離心，取上清為所提基因組。
8．電泳或者其他方法檢測(cè)，進(jìn)入下游實(shí)驗(yàn)。